Inleiding:
Dithiothreitol is een algemeen gebruikt reducerende stof, ook bekend als dimercaptothritol (DTT), die een sterk reducerende capaciteit heeft. Zijn reducerende vermogen is grotendeels te wijten aan de conformationele stabiliteit van zijn geoxideerde staat zes-embered ring (die disulfide-banden bevat). Het verlagen van het vermogen wordt beïnvloed door de pH en kan alleen een reducerende rol spelen als de pH hoger is dan 7. Dit komt omdat alleen het negatieve ion van het thiolzout (-s -) zonder het proton actief is, terwijl het thiol (-SH) niet actief is. Maar sulfhydhyrylgroepen hebben over het algemeen een pKa van ~ 8.3.
Chemische eigenschappen:
De reductie van een typische disulfide-binding door dithiothreitol bestaat uit twee opeenvolgende wisselingsreacties van sulfhydhyryl-disulfide-binding. De tussentoestand die door de eerste reactie wordt gevormd is zeer instabiel, omdat de tweede sulfhydhylgroep op DTT de neiging heeft om te verbinden met het geoxideerde zwavelatoom, zodat de tussentoestand snel wordt omgezet in de cyclische oxidatiestructuur van DTT om de reductie van disulfide-bindingen te voltooien. Dithiothreitol (DTT) heeft een slechte stabiliteit omdat het gemakkelijk geoxideerd wordt door lucht. Maar het kan bevroren worden gehouden of in inert gas worden behandeld om de levensduur ervan te verlengen. Door de lage nucleofiliciteit van de geprotesteerd zwavel neemt de effectieve reductie van DTT af met een dalende pH. Tris(2-carboxyethyl)fosfor HCl (TCEP hydrochloride) kan worden gebruikt als vervanging voor DTT bij een lage pH en is stabieler dan DTT.
Rol van:
Dithiothreitol heeft een anti-oxidant effect, dat de reducerende groep op het enzym molecule kan beschermen, de reducerende omgeving kan handhaven, en de activiteit van het enzym kan stabiliseren. DTT bevat ook bepaalde ribonuclease-inhibitoren, die de activiteit van ribonuclease kunnen remmen. "Het heeft soortgelijke effecten als mercaptoethanol (dimercaptoethanol), maar DTT heeft een veel minder irriterende geur en veel minder toxiciteit dan mercaptoethanol." Toen de concentratie van DTT 7 maal lager was dan die van mercaptoethanol, waren de twee effecten vergelijkbaar. Maar DTT is iets duurder. Het wordt gebruikt als een eiwitthiolbeschermer en voor de analyse van eiwitdisulfide-bindingen door middel van splijtstoffen en sequentiële analyse.
Toepassing:
Dithiothreitol (DTT) is een klein molecuul organisch reduceermiddel met de chemische formule C4H10O2S2, die voornamelijk op het gebied van de biotechnologie wordt gebruikt als eiwit cleavage reagens. Momenteel wordt de meest gebruikte methode voor de synthese van dithiothreitol gebruikt om thritol te oxideren met kaliumpermangate, en vervolgens om thiointermediair te verkrijgen onder de werking van thioazijnzuur, en tenslotte het thiointermediate te hydrolyseren om dithiothreitol te verkrijgen.
Doel
Gebruikt om te gebruiken? Een uitstekend reagens voor het in stand houden van de SH-basis in gereduceerde toestand; kwantitatieve reductie van disulfide; DTT was effectief in het verminderen van eiwitdisulfide-bindingen in de monsterbuffer vóór SDS-PAGINA. DTT kan ook worden gebruikt om de disulfide-brug van het kruiskoppelingsmiddel N,N '-bis (acryloyl) cystamine te verminderen om de polyacrylamide gel matrix te breken; in eiwitsequentieanalyse wordt het gebruikt om disulfide-verbindingen te verwijderen; om stijgende en dynamische reductiereacties te onderzoeken; Het voorkomt de oxidatieve reactie die optreedt tijdens de extractie van cholecystokinine uit hersenen en duodenaal weefsel
Smeltpunt: |
41-44 °C (verlicht) |
Kookpunt: |
125 °C. |
Specifieke optische rotatie: |
-0.2~+0.2°(20 ºC/D)(C=5,H2O) |
Dichtheid van de dichtheid: |
1.04 g/ml bij 20 °C. |
Dampdichtheid: |
5.3 (vs lucht) |
Dampdruk: |
0.019-0,29 Pa bij 20-50ºC |
Index van breking: |
1.5200 (schatting) |
Flashpoint: |
>230 °F |
Opslagomstandigheden: |
-20°C (of 4°C op korte termijn). |
Mate van oplosbaarheid: |
H2O: 50 mg/ml, helder en kleurloos |
vorm: |
Kristallisatie van wit poeder |
Zuurtegraad (pKa): |
PK1:8.9 (25°C) |
PH-waarde: |
4.0-6.0 (20-25ºC, 0,1 m in H2O) |
Geur: |
Een slechte geur |
PH-bereik van de verkleuring van de indicator op basis van zuur: |
4 - 6 bij 15,4 g/l bij 25 °C. |
Oplosbaarheid van water: |
vrij oplosbaar |
Gevoeligheid: |
Luchtgevoelig |
Maximale golflengte (max. |
Λ: 260 nm AMAX: 0.400λ: 280 nm AMAX: 0.100 |
stabiliteit: |
Stabiel, maar gevoelig voor hitte. Niet compatibel met sterk oxiderende stoffen. De vriestemperatuur werd op -20 tot -10 ° C. gehouden |
LogP: |
0.07 bij 25ºC en pH5 |