De Naam van het product
Generische Naam: De Uitrusting van de Extractie van Nucleic Zuur
Commercië Le Naam: De virale Snelle Uitrusting van de Extractie DNA/RNA (rotatie-Kolom)
Verpakking
DP4611 (50 preps) /DP4612 (100 preps) /DP4613 (200 preps)
Voorgenomen Gebruik
Voor isolatie en reiniging van het virus van uitstekende kwaliteit DNA/RNA van cellen, bloed,
serum, plasma, lymfe, acellular vloeistof, bovendrijvend of divers virus van de celcultuur
het bewaren van vloeistof.
Principe
De uitrusting past de unieke bindende bufferProtease K toe lyse snel nuclease van virus
en stel virus buiten werking. Dan adsorberen genoomDNA en RNA selectief aan silicified
membraan in hoge zoute oplossing. Onzuiverheden zoals cellulaire metabolite en proteï Nen enz.
worden verwijderd door een reeks van elution- centrifugerenstappen. Tot slot gezuiverd
genoom DNA en RNA worden uitgewassen van kiezelzuurmembraan door lage zoute elution buffer EB.
Opslag en Geldigheid
1. De proteï Nase K (droog poeder) wordt opgeslagen onder -20± 5º C; De buffer RW kan onder worden opgeslagen
2~8º C voor é é N maand, en -20± 5º C é é N jaar; Andere componenten worden onder opgeslagen
kamertemperatuur.
2. Deze uitrusting zal é é N jaar geldig zijn. Gelieve te gebruiken het binnen zijn geldigheid.
Toepasselijke Instrumenten
Dit model is geschikt want gekoelde de hoge snelheid van BioTeke CR3180 benchtop centrifugeert
en gelijkaardige instrumenten.
Eisen ten aanzien van Steekproeven
Gelieve te gebruiken verse steekproeven of steekproeven die behoorlijk worden opgeslagen. Wij stellen experimenten voor
wordt gepresteerd zodra de steekproeven worden verzameld. Gelieve te slaan steekproeven bij 2~8 º C op
tijdelijk of bij -20º C of -80º C voor behoud op lange termijn.
Procedures
* Gelieve te voegen absoluut ethyl-alcohol in WB van de wasbuffer zoals toe gespecificeerd
v3o3or gebruik!
Voorbereiding van proteï Nase K:
Voeg 1000μ L van laboratoriumwater in toe elk stuk van proteï Nase K (droog poeder) (def.
de concentratie is 40mg/mL). Mengeling het bovenkant - onderaan tien keer tot het volledig wordt opgelost.
Gelieve te slaan het bij 2~8º C voor gebruik en -20 op korte termijn op± 5º C voor opslag op lange termijn. Vermijd
herhaalde freeze-thaw voor meer dan vijf keer.
1. Voeg 200μ L van vloeibare steekproef (serum, plasma, bloed enz. ) in een 1.5mL centrifugebuis toe.
Voor aanvankelijk volume van vloeibare steekproef minder dan 200μ L, gelieve toe te voegen 1× PBS tot het is200μ L. Als het aanvankelijke volume tussen 200μ L-300μ L is, te voegen gelieve reagentia toe
proportioneel in de verdere procedures. Voor weefselsteekproeven, gelieve te malen
eerst, gebruik 200μ L van buffer pond, dan het opnieuw uit te stellen en toe te voegen aan viruslysis buffer.
2. Voeg toe 500μ L van viruslysis buffer VL1. Voeg 20μ L van proteï NaseK oplossing (toe 40mg/mL).
Schok 15 seconden voor zich het voldoende mengen. Dan broed bij 65 uitº C voor 15min. Tijdens
de incubatie, te mengen gelieve op en neer het voor 3-4 keer.
3. Voeg absoluut ethyl-alcohol 300µ L toe en toen schud het op en neer om me te mengen
grondig.
De juiste sterkte en grondig de mengeling zijn zeer belangrijk in de bovengenoemde procedures.
Het ontoereikende mengen zich zal in lage opbrengst van nucleic zuur resulteren.
4. Breng de oplossing en de doen pluizen precipitatie (als er) zijn in een rotatiekolom over
VI (rotatiekolom in inzamelingsbuis). Centrifugeer bij 10, 000rpm voor jaren '30, en leeg
filtraat in inzamelingsbuis.
5. Voeg 700µ L van buffer RW (gelieve te verzekeren het absolute ethyl-alcohol v3o3or gebruik wordt toegevoegd) toe
en centrifugeer bij 12, 000rpm voor jaren '30. Verwerp filtraat.
6. Voeg 500µ L van buffer RW (gelieve te verzekeren het absolute ethyl-alcohol v3o3or gebruik wordt toegevoegd) toe
en centrifugeer bij 12, 000rpm voor jaren '30. Verwerp filtraat.
7. Zet rotatiekolom VI terug naar de inzamelingsbuis en centrifugeer bij 13, 000rpm voor
2 min. Verwijderen wasbuffer indien mogelijk. Anders zal de resterende ethylalcohol beï Nvloeden
de volgende reactie.
8. Breng rotatiekolom VI naar een nieuwe centrifugebuis over en voeg voorverwarmde 30-50µ L toe
(65 º C - 70º C badwater ) buffer EB aan midden van adsorptiefilm. Plaats het bij
kamertemperatuur voor 2min. Centrifugeer bij 12, 000rpm voor 1min. Voeg oplossing in rotatie toe
de kolom en plaatst het bij kamertemperatuur voor 2min. Centrifugeer bij 12, 000rpm voor 1min.
9. DNA kan bij 2-8 worden opgeslagenº C, en -20º C voor opslag op lange termijn. Het is beter om te keren
transcribeer RNA in cfDNA of opslagRNA bij -80º C.
Prestaties
1. Deze uitrusting kan worden gebruikt om nucleic zuur uit bloed, plasma en serum te halen
effectief
2. De resultaten van de uitrusting zijn stabiel en hebben goede herhaalbaarheid.
Aandacht
1. Gelieve te voegen ethylalcohol in buffer RW toe zoals v3o3or gebruik gespecificeerd (voeg binnen 60mL pf ethylalcohol toe
15mL de ethylalcohol RW, of 100mL in 25mL ethylalcohol RW, of 200mL in 50mL RW), en mengt zich
het omhoog grondig). Gelieve te controleren om het herhaalde toevoegen te vermijden! 2. Om verminderde activiteit te vermijden en vervoer te vergemakkelijken, is de protease K
verstrekt als droog poeder. Na ontvangstbewijs, te centrifugeren gelieve binnenkort en 1mL toe te voegen
steriel op te lossen water (de definitieve concentratie is 40mg/mL). Als herhaalde vorst
en de dooi zou proteaseactiviteit verminderen. Gelieve te verdelen pakketten (20μ L per
pakket) onmiddellijk na ontbinding en opslag onder -20º C.
3. Gelieve te behandelen het deksel wanneer strak met klaar geweest het gebruiken van oplossingen om vervluchtiging te vermijden,
oxidatie en verandering van PH waarden na lange blootstelling aan lucht